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必知干貨—DAB染色液的使用方法及注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2023-03-13    點(diǎn)擊次數(shù):4016

  必知干貨—DAB染色液的使用方法及注意事項(xiàng)


  DAB染色液用于免疫組化染色,應(yīng)用在Dako 自動(dòng)染色系統(tǒng)上。

  DAB染色液的使用方法

  1.DAB顯色液配制

  10mM Tris-HCl (pH7.6) 9mL +DAB (diaminobezidin 3,3-二氨基聯(lián)苯胺) +0.3%(W/V) NiCl2 或CoCl2 1mL ,顯色時(shí)加入5-10mL 30%H2O2 混勻后立即使用

  2. 顯色

  準(zhǔn)備好含有待測蛋白的固相膜:包括電泳、轉(zhuǎn)印、封阻、一抗(或生物素)處理、辣根過氧化酶(HRP)標(biāo)記的二抗(或鏈霉親和素)處理、清洗等步驟。

  3.加入適量的DAB顯色液,鋪滿整個(gè)固相膜表面(可按比例增減)。

  4. 置于平式搖蕩儀上,在室溫下孵育2至5分 鐘,避免光照(暗室操作),直至棕褐色沉淀出現(xiàn)。

  5.用鑷子夾起固相膜,放進(jìn)無離子水里清洗。

  6.空氣中晾干。

  7. 拍照記錄 。

  DAB染色液的注意事項(xiàng)

  1. DAB溶液應(yīng)低溫密封保存。如有結(jié)晶析出,應(yīng)確保結(jié)晶溶解再行使用;

  2. 顯色工作液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配,新鮮配制的工作液應(yīng)為無色或淺棕色,如顏色過深,請勿使用;

  3. DAB在常溫下不穩(wěn)定,每次取用后均應(yīng)及時(shí)加蓋密封放回冰箱,以免因DAB分解影響實(shí)驗(yàn),或因滲漏造成實(shí)驗(yàn)環(huán)境污染;

  4. DAB有潛在致突變作用,操作時(shí)應(yīng)注意穿戴好防護(hù)用具。

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