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蛋白質電泳分子量標準試劑實驗注意事項

更新時間:2024-02-29    點擊次數(shù):1520

  蛋白質電泳分子量標準試劑實驗注意事項


  1) 由于細胞凋亡是一個快速的過程,建議樣品在染色后1小時之內進行分析。

  2) 對于貼壁細胞,消化是一個關鍵步驟。貼壁細胞誘導細胞凋亡時如有漂浮細胞,需收集漂浮細胞和貼壁細胞后合并染色。處理貼壁細胞時要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。胰酶消化時間過短,細胞需要用力吹打才能脫落,容易造成細胞膜的損傷, 蛋白質電泳分子量標準試劑PI攝入過多;消化時間過長,細胞膜同樣易造成損傷,甚至會影響細胞膜上磷脂酰絲氨酸與Annexin V-FITC的結合。消化時將胰酶鋪滿孔板底后,輕搖時胰酶與細胞充分接觸,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段時間,待細胞間空隙增大,瓶底呈花斑狀即可終止。在消化液中盡量不用EDTA,EDTA會影響Annexin V與PS的結合。


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  3) 實驗中如需要固定細胞,比如在檢測凋亡的同時檢測細胞周期,只能選用Annexin V-FITC,而不能選用Annexin V-EGFP,因為在固定過程中EGFP會變性導致喪失激發(fā)熒光的能力。固定前需要先將細胞與Annexin V-FITC進行孵育,并用binding buffer洗掉未結合的Annexin V-FITC。因為固定過程中細胞通透性增加會產生細胞碎片,可以和Annexin V結合,對結果產生干擾。

  4) 如果樣品來源于血液,請務必除去血液中的血小板。 蛋白質電泳分子量標準試劑因為血小板含有PS,能與Annexin V結合,從而干擾實驗結果??梢允褂煤?strong>EDTA的緩沖劑并在200 g離心洗去血小板。

  5) 試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。

  6) Annexin V-FITC和PI是光敏物質,在操作時請注意避光。

  注:以上資料僅供參考!

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